可見分光光度計常用的定量分析方法是標(biāo)準(zhǔn)曲線法。即先用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制一定濃度的溶液,再將該溶液配制成一系列的標(biāo)準(zhǔn)溶液。在一定波長下,測試每個標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度,以吸光度值為縱坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)溶液對應(yīng)得濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。zui后,將樣品溶液按標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制程序測得吸光度值,在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出樣品溶液對應(yīng)的濃度或含量。
一般采用低雜散光,高分辨率的單光束單色器,保證了波長準(zhǔn)確度、波長重復(fù)性和更高的分辨率。自動調(diào)0%T和100%T,自動調(diào)波長及多種方法的數(shù)據(jù)處理功能。高分辨率,寬大的樣品槽,可容納100mm光徑吸收池和相應(yīng)的反射附件。儀器配有標(biāo)準(zhǔn)的RS-232雙向通訊接口,可外接打印機,打印相應(yīng)的實驗數(shù)據(jù)。工作電源一般為220V,允許10%的電壓波動。為了延長光源使用壽命,在不使時不要開光源燈。單色器是儀器的核心部分,裝在密封盒內(nèi)不能拆開,為防止色散元件受潮發(fā)霉,必須經(jīng)常更換單色器盒干燥劑。必須正確使用吸收池,保護(hù)吸收池光學(xué)面。光電轉(zhuǎn)換元件不能長時間暴光,應(yīng)避免強光照射或受潮積塵。
可見分光光度計主要由電光系統(tǒng)、光學(xué)系統(tǒng)、光電系統(tǒng)、電子系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理、輸出打印系統(tǒng)等幾個部分組成。
(1)電光系統(tǒng) :電光系統(tǒng)主要由氘燈、鎢燈和相應(yīng)的電源組成。電光系統(tǒng)對整機的穩(wěn)定性有很大的影響,是儀器不穩(wěn)定的主要原因之一。
(2)光學(xué)系統(tǒng):光學(xué)系統(tǒng)包括外光路系統(tǒng)(轉(zhuǎn)向平面鏡、聚光鏡)、單色器兩個主要部分;其中,外光路和單色器各有很多類型。單色器是紫外可見分光光度計雜散光的主要來源,是整機使用時,主要分析誤差的來源之一。
(3)光電系統(tǒng):夕光電系統(tǒng)是將光信號變?yōu)殡娦盘柕年P(guān)鍵部件,直接影響儀器的靈敏度和適用范圍;一般有光電管、光電倍增管、硅光電池、二極管陣列等。
(4)電子系統(tǒng) :電子系統(tǒng)主要由放大器、A/D變換器等組成;其中的放大器,也是影響整機靈敏度、穩(wěn)定性的主要部件。它又是儀器噪聲的主要來源部件,直接影響紫外可見分光光度計的分析誤差。 、-
(5)數(shù)據(jù)處理、輸出打印系統(tǒng) :數(shù)據(jù)處理、輸出打印系統(tǒng)是決定整機的自動化程度的關(guān)鍵部件;特別是軟件部分,直接影響紫外可見分光光度計的質(zhì)量。